Reconocimiento indirecto de la presencia de bacterias

Reconocimiento indirecto de la presencia de bacterias

Presentación

Aun si no poseemos el material necesario como para observar en forma directa la presencia de bacterias podemos determinar su existencia, aunque no de forma directa. Esto tiene aplicaciones directas ya que existen una serie de situaciones en las que incluso si tenemos la capacidad de observar a las bacterias directamente elegimos no hacerlo, muestra de esto es el test del aliento desarrollado para evitar realizarle una biopsia al paciente y en vez de ello analizar los compuestos producidos por los microorganismos, siendo estos compuestos propios solo de ellos.

En esta entrada analizaremos una de las formas básicas de evidenciar la presencia de bacterias.

Marco teórico

Las bacterias poseen una serie de enzimas implicadas en su metabolismo que extraen los átomos de hidrógeno de sustratos específicos, liberándolos al medio. Este grupo de enzimas es conocido como deshidrogenasas. En esta práctica no nos concentraremos en un tipo específico de enzima sino en los productos de estas: los hidrógenos.

Al adicionar azul de metileno a un medio contaminado con bacterias, y por ende que posee enzimas deshidrogenasas, este reacciona con los átomos de hidrógeno producidos y se reduce, al reducirse pierde su coloración azul y se torna translúcida. 

Con todo esto, si observamos que la muestra inicialmente teñida de azul por el azul de metilo se va decolorando hasta volver a su color original podemos tener la certeza de que ese medio posee átomos de hidrógeno que posiblemente hayan provenido de sustratos  del medio catalizados por las enzimas deshidrogenasas de las bacterias.

Materiales

-Cinco muestras de leche de diferente procedencia.

-Azul de metileno.

-Cinco tubos de ensayo 15x150 mm.
-Cinco tapones para tubo de ensayo.

-Goteros.

-Marcador indeleble.

-Baño María de laboratorio.

Procedimiento

1. Obtener cinco muestras de leche de diferente procedencia (en polvo, materna, fresca contaminada, yogurt bebible, evaporada).
2. Vierta 5 mL de las muestras en cinco tubos de ensayo diferentes.
3. Rotular con el marcador cada tubo de ensayo indicando su contenido.
4. Adicionar 2 gotas de azul de metileno a cada tubo.
5. Tapar cada tubo con el tapón estéril.
6. Colocar los tubos en baño María a 37ºC,  esperar una hora.

Resultados y conclusiones

La siguiente tabla muestra la coloración inicial de las diferentes muestras:

Una vez transcurrido el tiempo observamos todas la muestras, excepto la muestra de leche contaminada, mantienen su coloración inicial. 

A partir de estos resultados confirmamos la presencia de enzimas deshidrogenasas en la leche contaminada y con ella la presencia de bacterias en ella.

Este experimento puede ser repetido con otros medios líquidos como agua estancada, agua potable y agua de río, etc. Un posible inconveniente es la sensibilidad de este experimento ya que requiere de una gran población bacteriana para poder evidenciar un cambio en la coloración, esto limita el tipo de muestras que pueden ser analizadas. Este inconveniente óptico puede ser corregido utilizando un espectrofotómetro para encontrar la variación en la coloración.

Extraído de:
Guía de laboratorio de Biología celular UNMSM, Lazo F, Suyo M, Vivas D, Lima, 2016, pág 8, 9 y 10 .