Tinción de Gram

Tinción de Gram

Es la coloración más empleada en bacteriología, fue propuesta por el microbiólogo danés Christian Gram en 188. Esta técnica permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias: Gram positivas (+) y Gram negativas (-). Su fundamento radica en la diferencia estructural a nivel de su pared celular en ambos grupos. Ello se debe a la precipitación a nivel del citoplasma del cristal violeta con la solución de Lugol, formando un compuesto insoluble Cristal violeta-Lugol;  en algunas bacterias (Gram +) no se puede extraer con solvente alcohol-acetona, mientras que en otras (Gram -) sí se puede extraer. Debido a que las Gram negativas no se puede teñir de cristal violeta, se necesita una tinción de fondo con safranina o fucsina básica para permitir su visualización. 

Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular bastante gruesa que rodea a la membrana citoplasmática; se compone de peptidoglicano o mureina y ácidos teicoicos.

Las Gram negativas tienen una pared celular más delgada que se encuentra  rodeada por una membrana externa, es decir, las bacterias gram negativas presentan dos membranas. La membrana externa presenta una molécula denominada lipopolisacárido o LPS.

Procedimiento de la coloración Gram

1. Prepara el frotis de la muestra en un portaobjetos limpio.
2. Fijar la muestra a la llama del mechero en forma suave.
3. Cubrir la preparación con cristal violeta o violeta de genciana y dejar actuar por un minuto.
4. Lavar con agua destilada.
5. Cubrir el preparado con lugol y dejar actuar por un minuto.
6. Lavar con agua destilada.
7. Decolorar con alcohol acetona hasta que no se desprenda más colorante.
8. Lavar con agua destilada.
9. Cubrir la preparación con safranina o fucsina de Ziehl y dejar actuar por 30 segundos. 
10. Lavar con agua destilada.
11. Secar la preparación y observar al microscopio con el objetivo de inmersión.

Resultado

Las bacterias Gram positivas aparecen de color violeta y las Gram negativas de un color rosado o granate. A continuación se mostrarán algunos ejemplos de bacterias tanto Gram positivas como negativas.

Bacterias Gram positivas

Bacillus sp

Streptococcus mutans

Staphylococcus sp

Bacterias Gram negativas

Salmonella sp

Escherichia coli

Neisseria sp.

Extraído de: Tomás Agurto S., Técnicas de coloraciones de células y tejidos, editorial Imprenta Unión, pag 88-89.